间接免疫荧光抗核抗体检测步骤：抗核抗体比较常用的测定方法有这4种

抗核抗体测定，是一种为自身免疫性的一些疾病进行筛选的试验。抗核抗体可以通过多种自己身上的免疫病中都可以出现不同程度的阳性概率，比如（SLE，95%至100%）是系统性红斑狼疮、（RA，10%至20%）是类风湿性关节炎、（95%至100%）是一种原发性的胆汁性肝硬化。当我们体内的皮质激素得到治疗之后，抗核抗体的阳性率就可以降低下去了。临床中的医生一般需要参考几项的免疫指标，并结合临床上的一些表现以及其他的辅助检查来进行综合的分析才能作出诊断。

因为抗核抗体有着复杂性与多样性，所以它的测定方法是非常多的。抗核抗体比较常用的方法有免疫荧光测定法、放射免疫测定法、ELISA测定法以及免疫印迹技术测定法等：

1、免疫荧光法。荧光免疫组化法是检测血清中ANA比较常用的一种方法。一般用小鼠肝的切片或者是印片来当细胞核基质的比较多，而且得出的结果会更稳定和可靠，可以通过荧光显微镜的观察下看到细胞核有着荧光着色呈现阳性反应。还有些人是用锥虫或者是血鞭毛虫（比如绿蝇短膜虫的试验法）作为基质来测定抗dsDNA中的抗体，由于这类血寄生虫的动物基体中有很多的纯dsNDA，没有其他抗原的干扰。如果显示阳性反应时，可以看见鞭毛的一边的动基体会出现很清晰的一种荧光。所以，这个试验可以用来测定抗dsDNA的抗体的优点是特异性强以及敏感性高。

2、放射免疫法。它经常拿来检测抗DNA中的抗体，方法有Farr法和过滤法这两种。Farr法它的原理是拿同位素来标记DNA，当被标记的DNA与被检血清中的抗DNA的抗体进行结合时，通过用百分之50的硫酸铵饱和液进行沉淀，再来对比沉淀物以及上清液中含有的放射活性，这样就可以得到DNA的结合活性，通常结合率高于20%就是阳性。而过滤法是通过对分离结合物的时候然后用纤维素酯的那种薄膜滤器（0.45μm的孔径）来进行过滤，把游离的DNA滤去然后跟抗体进行结合的那些复合物阻挡在滤器膜上。

3、ELISA测定法。它在临床上主要用来间接ELISA检测中的抗dsDNA抗体，它的重复性和敏感性对于流免疫电泳和双扩散都比较高，现在已经有试剂盒可以供应了。

4、免疫印迹测定法。这种测定方法是先把混合的抗原作为凝胶电泳，然后分离开到不同的地方，把这些带有转印放到硝酸纤维素的薄膜上，之后拿酸标抗体或者是放射性的同位素来进行标记抗体，然后进行检测和分析。因为这种试验不需要对单个抗原纯化，可以在同一个固相上来进行多项分析的检测，它的灵敏度高，而且特异性强。所以它在出现自身免疫病的患者的血清中进行多种的自身抗体的这些检测中广泛运用，比如抗Sm抗体检测、检测抗RNP抗体、检测抗SS-A抗体、检测SS-B抗体等。

当然，抗核抗体测定还有传统的琼脂双向的扩散法、传统的对流免疫的电泳法、传统的间接的血凝法以及补体结合试验等这些方法，这里就不一一介绍了。

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