预防仔猪大肠杆菌最有效的方法 仔猪大肠杆菌性腹泻的防治
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免疫预防
ETEC的致病因子复杂，血清型多，致死率高，因此预防ETEC的感染显得尤为重要。疫苗是免疫预防的重要手段，通过给予产乳的母猪接种ETEC·F4(k88)、F5 (k99)、F6 (987P)和F41的疫苗来可降低疾病发生的风险。
但疫苗预防仔猪腹泻的效果并不理想，由于各地致病性大肠杆菌血清型多且分布有差异，使得研制疫苗存在困难，所以到目前为止没有一种疫苗可以完全的预防仔猪腹泻，同时疫苗还存在生产成本较高、安全性等问题。
以下是几种疫苗的研究现状。
全菌苗是先将培养好的菌液灭活，然后进行乳化制得的，所得的疫苗成本低，抗原成分全面，免疫保护作用可达100%。
王保宁等研究表明猪致病性大肠杆菌佐剂疫苗能刺激小鼠产生特异抗体，口服高剂量含佐剂疫苗抵抗致病性大肠杆菌效果可达100%，具有很好地预防作用。
与此同时，全菌苗也有很大的局限性，由于ETEC血清型多，毒力因子易突变，使得全菌苗存在应用范围小，只能针对部分菌株有效，且免疫原性成分少，无关物质较多，只能诱导体液免疫应答等缺点。
基因工程疫苗是通过基因重组技术，将已编码的具有保护性的、能产生免疫反应的病原体插入到质粒上，并导入机体产生抗原蛋白，诱导机体产生免疫应答。
Hur J等研究了新型多价大肠杆菌候选疫苗对仔猪大肠杆菌病的保护效果，通过口服和肌肉内给药，结果显示所有免疫母猪的初乳IgA和IgG水平升高，仔猪血清IgG和IgA水平显著
增加，说明疫苗接种后可诱导猪的全身性和免疫反应，而且口服和肌肉给药都能够可以有效地保护仔猪免受ETEC的感染。
虽然基因工程疫苗为研制致病性大肠杆菌疫苗提供了有效的手段，但从目前各种商品性或者实验性的大肠杆菌病疫苗的研究使用情况来看，常规苗比基因工程苗免疫效果好。 亚单位疫苗是通过提取菌毛的黏附素，经佐剂乳化制备而成。
ZHANG H等研究出一种将肠毒素融合蛋白SLS（STa-LTB-STb）与主要纤维F4ac和F5抗原混合的新型多价疫苗，结果显示所有接种母猪的血清和初乳中的IgG效价均显著高于对照组，接种组的仔猪比未免疫组的仔猪具有明显更健康的状态。
此外，F41 ETEC攻毒后，接种过疫苗的仔猪无腹泻情况，对照组30%仔猪出现腹泻，说明该疫苗能够预防ETEC感染。但是亚单位疫苗提取菌毛的生产工艺较复杂，操作困难，价格昂贵，不适合推广使用。
药物治疗
(1) 抗生素
抗生素能够干扰其他细胞的生长和发育。抗生素起效快，抗菌谱广，作用效果好，使用抗生素防治仔猪腹泻是最常用的方法，临床上常用药物主要有诺氟沙星、恩诺沙星、硫酸庆大霉素、阿普拉霉素等。
但是随着抗生素及其同类物作为饲料添加剂的不合理使用，导致细菌对抗生素产生耐药性，药物残留、毒副作用等问题也日渐突出。
姜中其等对分离的病原性大肠杆菌进行耐药监测，结果显示病原性大肠杆菌对氯霉素、复方新诺明、多西环素、链霉素耐药率分别为100%、86.7%、82.3%、81.8%，对另外五种抗生素的耐药率高达56.4%以上，且大多数大肠杆菌为多重耐药。
黄琴等通过采集广州某养殖场腹泻仔猪、健康仔猪及环境的样本，检测其对12种抗生素的耐药性，结果表明，分离的菌株耐药水平高，其中46.09%菌株具有多重耐药性，且腹泻仔猪源菌株多重耐药率显著高于健康仔猪源及环境源菌。
长期大量使用抗生素，不仅能使细菌产生耐药性，还会损害仔猪的脏器功能，毒副作用大，破坏机体的微生态平衡，同时药物残留还可能会造成环境污染。为此世界各国不断出台政策，禁止一些抗生素在饲料中使用，当前寻找安全、环保、毒副作用低的药物代替抗生素显得尤为重要。
(2) 微生态制剂
微生态制剂是近年来新型预防仔猪腹泻的手段，乳酸菌作为重要的益生菌，能够表
达出具有免疫作用的抗原，诱导机体产生免疫应答。谢全喜等研究发现，在饲料中
添加1.0‰复合微生态制剂肽菌素不仅能够降低仔猪腹泻率，提高仔猪免疫力和生产性
能，还能调节肠道菌群的平衡。
朱剑锋等用复合微生态制剂代替饲粮中抗生素，饲喂断奶仔猪30 d，结果表明，复合微生态制剂能够使断奶仔猪粪便中大肠杆菌含量显著降低，乳酸菌含量显著升高，达到降低仔猪腹泻率、改善仔猪肠道的目的。
虽然微生态制剂安全、无耐药性和毒副作用，但是治疗时间较长，只能通过提高机体免疫力和调节肠道平衡来发挥作用，对于急性腹泻治疗效果不明显。
(3) 中药治疗
中药是我国传统药材，从古代一直延续到现在，经历几千年的研究，经久不衰，在我国医药行业乃至世界都具有十分重要的地位，是我国的国粹。
现代研究表明，中药能够抗肿瘤、抗炎、抗菌、调节免疫力等，在治疗疑难杂症方面效果显著。中药富含多种天然化学成分和营养成分，安全环保，毒副作用低，无耐药性等优点，深受国内外学者的研究。
20世纪50年代，陆续发现了具有抗菌作用的中药，清热解毒类抑菌效果明显，如黄连、黄芩、黄柏等。近年来，中药在仔猪腹泻方面得到了广泛的应用。
王雪飞等将研制出的中药复方制剂补中益气散给予即将生产的母猪，作为产前的调理。结果显示，仔猪存活率和腹泻率分别为91.3%和3.9%，说明补中益气散能够提高母猪的免疫力。
利凯等将白头翁、黄连、黄柏等13味中药配比后给腹泻仔猪灌服。结果表明，治疗组与模型组相比，仔猪腹泻频率为33.3%，腹泻指数为1.2，说明复方中药猪痢停能够治疗仔猪腹泻。
路卫星等将板蓝根、蒲公英、黄连等15味中药配比制成散剂，发现其在预防仔猪腹泻方面效果显著。 中药治疗仔猪腹泻虽然前景广阔，但也存在着一些问题。
首先，中草药成分种类复杂，受多种环境因素影响，且炮制方法也会影响其成分含量，因此药材的质量控制至关重要。其次，现有的防治仔猪腹泻的经验药方很多，但大都较为粗糙，正确性高，准确率低。
同时，目前对中草药方剂配伍机制及其有效物质基础的研究尚不成熟，推广应用难度大。所以，中草药在治疗仔猪腹泻方面还需要不断完善。
山茱萸-牡丹皮药对概述
山茱萸-牡丹皮药对来源
山茱萸和牡丹皮来源于六味地黄汤，是该方剂中的一对药。六味地黄汤是中医的经典名方，出自《景岳全书》卷五十三，即《小儿药证直诀》，由钱乙所创作。该方由熟地黄，山茱萸肉，山药，丹皮，泽泻和茯苓6味中药组成，具有滋阴补肾，肾阴亏虚的功效。
六味地黄汤的药理作用广泛，叶淑菁将六味地黄汤组方加减，并结合胰岛素治疗二型糖尿病患者，结果表明，患者血糖与对照组相比明显改善，说明六味地黄汤加减和结合胰岛素能够治疗二型糖尿病。
胡古玲针对患有阴道炎的病人，通过口服六味地黄汤和中药熏洗，并联合甲硝唑治疗，发现这种治疗方法治愈率高，效果显著，且无副作用，能够广泛应用于临床。
刘英雄等发现重组人干扰素α2b 联合六味地黄汤在治疗肾癌患者方面效果显著，结果显示，治疗后患者肿瘤标志物（NSE、β2-MG）水平显著下降，T淋巴细胞因子CD4 、CD4 /CD8 显著升高，CD8 显著降低。
综述所述，重组人干扰素α2b 联合六味地黄汤能够改善肾癌患者的病情，提高免疫力，且还能降低不良反应。
六味地黄汤中熟地黄，山茱萸，山药，泽泻，茯苓，牡丹皮可谓“三补三泄”，可分为三个药对，即熟地黄-泽泻、山茱萸-牡丹皮、山药-茯苓。
其中山茱萸性微温，味酸涩，补肝肾，益气血；牡丹皮性苦，微寒，归心、肝、肾经，具有清热凉血，活血化瘀的作用。
心主血，肝藏血，二者配伍能够达到补肝血与行肝血的作用；肝易生火，牡丹皮清热凉血，与山茱萸配伍能够补肝血和降肝火；山茱萸味涩，牡丹性苦，能够制约山茱萸涩滞之性；牡丹皮寒性制约着山茱萸的温性，能够调整六味地黄汤的寒温之性。
山茱萸和牡丹皮的研究概述
(1) 山茱萸
山茱萸在温暖、湿润的环境下容易生长，在中性或微酸性、较深的土壤中结出的果实大，果肉多。
山茱萸首次出现在《神农本草经》中，书中称其主心下邪气，寒热，温中，逐寒湿痹，去三虫，久服轻身等。山茱萸气微，味酸、涩、微苦；具有滋肝补肾，涩精固脱的功效；临床上用于治疗腰膝酸软、体虚多汗、尿频、眩晕耳鸣、内热消渴等病症。
山茱萸含有多种有效成分，主要包括环烯醚萜类、黄酮、有机酸、鞣质类、多糖等成分
此外，山茱萸还含有丰富的维生素（A、B、C）、氨基酸和蛋白质，具有非常重要的食
用和药用价值。
山茱萸的药理作用十分广泛，具有增强免疫力、抗菌、抗炎、抗氧化、抗肿瘤等功效。
齐静姣等通过构建大鼠的佐剂性关节炎模型，探讨山茱萸果核提取物对其免疫方面的影响；通过测量大鼠足趾肿胀程度，检测淋巴白细胞的表达情况及细胞因子的水平，发现山茱萸果核提取物能够抑制佐剂性关节炎。
魏思敏等利用紫外、红外光谱、透视电镜检测手段发现，山茱萸水提液制备的银纳米颗粒具有抑菌作用，且稳定性好。
赵艳艳等研究表明，山茱萸多糖能够抑制细菌的生长，对真菌没有抑菌活性，抑制革兰氏阳性菌的效果大于革兰氏阴性菌。其中，山茱萸多糖对大肠杆菌抑制作用最好，最小抑菌浓度为0.0625 mg·mL-1。
(2) 牡丹皮
牡丹的主要药用部位是牡丹根皮，首次出现在《神农本草经》中，书中称其主寒热，中风瘈疭、痉、惊痫邪气，除坚癥瘀血留舍肠间，安五脏，疗痈疮。其气芳香，味黴苦而涩；具有清热凉血、活血化淤的功效。
2015版药典中称其可用于热入营血，温毒发斑，吐血衄血，跌扑伤痛，痈肿疮毒等治疗。
牡丹皮含有多种有效成分，主要包括酚及苷类、单萜及其苷类、三萜类成分、有机酸、黄酮类和挥发油等，此外，牡丹皮还含有多糖、氨基酸和多种矿物元素。其中丹皮酚、没食子酸、芍药苷、儿茶素等含量较高。
牡丹皮药理作用广泛，具有抗肿瘤、抗菌、保护心血管系统、提高免疫力、降血糖等作用。Saahene RO等研究发现，用不同浓度的丹皮酚处理乳腺癌细胞，与对照组相比，癌细胞增殖活性低，凋亡指数高，说明丹皮酚能够抑制乳腺癌细胞的生长。
Zhou YD等研究发现，牡丹皮提取物能有效的抑制金黄色葡萄球菌和大肠杆菌O157 : H7，其最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌剂浓度(MBC)分别为1.56 mg/mL和6.25mg/mL。
(3)山茱萸-牡丹皮药对
山茱萸-牡丹皮药对的药理作用如下：戴冰等研究发现，六味地黄汤能够改善绝经后骨质疏松症，其机制可能与方中山茱萸-牡丹皮药对上调股骨成骨细胞中OPG的蛋白表达和下调RANKL的蛋白表达有关。
张嘉妮等研究表明，六味地黄汤能够改善小鼠肾阴虚证，且能够调节HPG轴功能紊乱，其中只有山茱萸-牡丹皮药对的作用与六味地黄汤相近。
山茱萸和牡丹皮在中兽药中的应用
卢亚飞等将山茱萸、山银花、黄芩等按不同比例配制成天然植物提取物，研究其对断奶仔猪生长性能、腹泻率等的影响，结果表明，天然植物提取物能够降低仔猪腹泻率。
郭洋经研究表明，由牡丹皮组成的钩藤******地黄汤治疗猪链球菌性脑膜炎的效果最好。李德鑫用牡丹皮组成的三黄石膏汤治疗疹块型猪丹毒，结果表明，该药的有效率96%。
秦绪光等将淫羊藿、山茱萸、牡丹皮、炒山药等组成中草药复方添加剂，研究其对繁殖后期种公鸡繁殖性能的影响，结果表明，中草药复方添加剂能够提高种公鸡的繁殖性能。
山茱萸和牡丹皮二者单独或共同作用在治疗禽畜疾病已有报道，但二者以药对形式在治疗仔猪腹泻方面鲜有研究。
主要研究内容
山茱萸和牡丹皮的药理作用广泛，二者单味药都具有抑制大肠杆菌的效果，但作为药对在治疗仔猪腹泻方面还鲜有报道。
论文首先研究山茱萸-牡丹皮药对最佳提取工艺，通过单因素试验筛选出影响较大的因素进行三因素三水平的正交试验，以最小抑菌浓度为指标确定药对的最佳提取工艺。
之后采用UPLC法确定药对中的有效成分，根据混合对照品与供试品色谱图进行对比，指认出药对中所含的单体成分，并进行组分配比。
然后建立兔回肠模型，根据兔回肠结扎实验判断山茱萸-牡丹皮药对及其单体组分抗LT肠毒素的强弱。最后通过巨噬细胞吞噬实验及ELISA测定细胞因子来探究中药有效成分对机体免疫应答的影响。