犬瘟快速检测试剂盒原理，快速筛查犬瘟热病毒-基于纸基微流控免疫检测芯片

纸芯片配合喷蜡打印机使得其制作成本与加工难度都降低到一个非常理想的水平，大大扩展了纸基微流控芯片的开发与应用前景。喷涂的蜡涂层创造了一个疏水的外壁，在纸芯片上划分出流道，实现流体控制、受控反应的目标。这一原理应用到犬瘟热病毒（Canine Distemper Virus， CDV）检测中，会带来很多新的潜力。

2017年，巴西圣保罗大学一课题组就这样的组合进行了研究，实现了纸基微流控芯片检测犬瘟热病毒的功能，取得了不错的结果。

亮点

该组采用了纳米金颗粒（AuNPs， Au Nanoparticles）作为检测区活性物质的载体。在免疫检测中，AuNPs主要与需求的生物分子（例如DNA，抗体，氨基酸，小肽），尤其是抗体，可以广泛地检测特定抗原并用于临床诊断。AuNPs与生物分子结合的一种方法是通过静电相互作用进行物理吸附，静电相互作用允许表面之间带有相反电荷的相互作用。在具备生理活性的条件下，抗体整体带正电荷，当与纳米金颗粒接触时发生静电相互作用并结合在一起。

将兔抗犬瘟热病毒（CDV，以下均简称）产生的抗体物理吸附在金纳米颗粒（AuNPs）的表面，并与CDV抗原孵育，形成免疫复合物。通过物理吸附将抗CDV抗体固定在微通道中，形成测试区。将包含缀合的AuNP的测试溶液施加到微通道的底部，并用0.01M pH为7.4的磷酸盐缓冲溶液洗脱。当含有AuNPs的溶液到达测试区时，免疫复合物中所含抗原的识别随之发生，并出现红线，代表样品呈阳性。

喷涂纸芯片蜡涂层采用的是施乐的一款可喷蜡的打印机，Xerox Phaser 8560 printer。这玩意据说已经完全买不到了，可供使用的蜡块量也非常少。喷涂完成后将纸芯片加热，表面的蜡涂层渐渐融化并随后渗入纸芯片纤维的空隙中，在纸张厚度上形成疏水屏障，屏障内自然是规划的亲水通道连接检测区。

合成AuNPs有两种方法，特克维奇方法（Turkevich method）与马丁法（Martin method）。前者将HAuCl4.3H2O溶于水后煮沸，并与加热的柠檬酸钠溶液混合搅拌直至冷却。后者用HAuCl4.3H2O与HCl的水溶液混合，并加入NAOH与NaBH4的混合水溶液搅拌，反应终止后置于暗处。随后用紫外光谱检测生成的AuNPs胶体，测量其直径并进行表征。特克维奇方法产生的颗粒直径较马丁法更大，可以与更多的抗体分子结合，是更合适的AuNPs。

艺术加工后的AuNPs

Anti-CDV制备比较常规，不再赘述。将制备好的Anti-CDV与AuNPs放入PH 9.2的硼酸盐缓冲剂并搅拌。搅拌后离心即可。

上述加工全部完成后，即可制备待测样本并进行检验，层析时间约为三分钟，阳性结果会使得检测区变红。

这种方法证明了将抗体物理固定在AuNPs上以及将抗体物理固定在纤维素表面上是可行的。该比色测定法为临床分析带来了简便性和多功能性，为CDV诊断提供了潜力。这种新的诊断工具专注于开发简单，廉价和强大的免疫分析方法，这些方法可用于疾病的初步筛查。

局限与思考

仅当包含整个免疫复合物的液体前沿到达纤维素表面上先前固定的抗体（分别为测试线和对照线）时，固定在纸上的Anti-CDV才能识别免疫复合物中包含的抗原并与其相互作用，从而形成红色阳性结果的线特征。

纤维素表面上固定的抗体与金纳米颗粒之间的非特异性相互作用可能导致假阳性结果。

这篇paper发在哪里呢？

发在BRAZILIAN ARCHIVES OF BIOLOGY AND TECHNOLOGY上，这是一个四区期刊。仔细回看这篇paper讲的内容，把它当作复刻验孕试纸就好了，检测对象换成了犬瘟热病毒抗体而已。当然CDV的检测之前没见到过，但是这篇文章的创新点实在有限，不能挑战更高的期刊也就是理所当然的事情了。

引用

Mazzu, Thiago & Donofrio, Fabiana & Bianchi, Beatriz & Travensolo, Regiane & Souza Junior, João & Moraes, Daniel & Gianini Morbioli, Giorgio & Segato, Thiago & Varanda, Laudemir & Carrilho, Emanuel. (2018). Paper-Based Microfluidics Immunoassay for Detection of Canine Distemper Virus. Brazilian Archives of Biology and Technology. 60. e17160317. DOI: 10.1590/1678-4324-2016160317.