猫肺部寄生虫感染：西班牙收容所新来的狗和猫心肺线虫和胃肠道寄生虫合并感染

文|郑法途说

编辑|郑法途说

前言

狗和猫的心肺线虫已成为寄生虫学家界关注的主要焦点，因为它们在一些欧洲国家出现和/或重新出现，并传播到一些非流行地区。

其中，据报道，欧洲感染狗和猫的重要物种是巨圆线虫血管圆线虫、狐皮Crenosoma vulpis、深圆线虫和短Troglostrongylus。

影响犬科动物和猫科动物呼吸道的三齿虫，如嗜气桉（毛细桉）和细桉（毛细桉）日益受到关注；然而，目前关于其在欧洲流行的数据有限。

一般来说，感染狗和猫的偏圆形线虫有一个间接的生命周期，其中蜗牛或鼻涕虫作为中间宿主；也有报道称，两栖动物、爬行动物、鸟类和小型哺乳动物可以作为副宿主。

然而，偏圆形细胞的副血小板宿主的谱还没有完全确定;在这方面，最近的实验研究表明，蟑螂等一些昆虫也可以作为a . abstrusus的副毒宿主。

相比之下，三螺旋体呼吸线虫的生命周期尚未完全解开；有人认为，它可能是直接的，也可能涉及蚯蚓作为兼性中间宿主。

中间宿主和副宿主在这些线虫的传播、维持和分布中都发挥着重要作用，受到野生环境城市化、全球变暖和动物种群流动等因素的影响。

在欧洲，心肺线虫常见于野生犬科动物和猫科动物，它们可以作为宿主的最终宿主。

在野生食肉动物中，狐狸被认为是这些病原体的主要宿主。

然而，心肺线虫在该大陆的伴侣动物中被认为是偶发性的，据报道发病率约为2%。

一些作者提出，这些低流行率可能与这些线虫被认为是隐蔽的和致命感染是不寻常的这一事实有关。

据报道，在整个欧洲，深奥曲霉和血管曲霉流行区的患病率分别约为24%和20%。

在西班牙，大多数关于心肺线虫流行的调查仅限于北部地区的野生动物。

因此，对圆线虫呈阳性的狼的百分比。

而嗜气性大肠杆菌低于10%，而血管不动杆菌的报告患病率高达22%；血管曲霉菌(3.4–43%)和圆线虫属的患病率较高。

在狐狸体内发现了嗜气杆菌(30-45%)。

然而，在家畜中进行的研究数量很少。仅在户外猫中进行了两项研究，结果显示，A. abstrusus和T. brevior的患病率分别为5%和3%(gian nelli等人，2017年)，Eucoleus spp .的患病率为1.3%。

此外，据报告，西班牙西北部的家猫体内也发现了深奥难懂线虫。

在狗中，分别在1.7%和0.75%的分析动物中检测到抗血管曲霉的抗体和该线虫的抗原。

该国目前没有关于家畜中其他心肺线虫流行率的数据。

出于所有这些原因，本研究的主要目的是评估来自加利西亚（西班牙西北部）的两个犬猫收容所的新来者中心肺线虫的患病率。

此外，研究了一些变量对心肺线虫流行的可能影响。

还讨论了检测到的寄生虫对公共卫生的潜在影响。

材料和方法

粪便样本和数据收集

在2019年10月至2021年9月期间，两个收容所(“Sociedad Protectora de Animales y Plantas de Lugo”和“Centro de Acollida e protec ción de animalis-CAAN”)的新来者(365只狗和65只猫)被纳入研究。

所有动物都来自加利西亚，这是西班牙西北部的一个自治社区，面积为29，574平方公里。

在进行抗寄生虫治疗之前，由监督收容所的兽医采集粪便样本；排便后立即从地板上收集，存放在分别贴有标签的塑料容器中，冷藏直至加工。

大多数粪便样本呈坚硬或糊状，只有八只狗腹泻。

兽医还提供了一些数据，包括每只动物的物种、性别和年龄；根据牙齿萌出估计年龄，并将动物分为四个年龄组:G1(6个月以内)、G2(6-12个月)、G3(1-3岁)和G4(3岁以上)。

寄生虫检测和形态学鉴定

使用经典的粪检显微镜方法检查粪便样本。

利用Baer Mann-wet zel技术，在10克粪便中检测到了亚线虫第一期幼虫(L1)。

根据之前描述的形态特征，以400倍放大倍数对L1进行了形态学鉴定。

此外，将3克粪便在42毫升水中匀浆，并用150微米的筛网过滤；填充两个15 ml试管，并以680×g离心5分钟。

弃去上清液。通过在乙醚的蔗糖溶液(比重1.28克/毫升)中漂浮，从单管沉积物中浓缩出呼吸性三尾虫以及其他胃肠道寄生虫的卵，并在100–400倍放大倍数下进行鉴定。

将第二个试管中的10微升沉淀物置于载玻片上，风干并用甲醇固定5分钟，然后通过商业免疫荧光分析进行处理，用于检测贾第鞭毛虫属包囊和隐孢子虫属卵囊。

亚线虫幼虫DNA提取及分子鉴定

为了确认L1元线虫的形态学鉴定，选择了对每个线虫物种测试呈阳性的代表性数量的样品。

在每个选择的样品中，分离每个物种的六个L1，并使用商业试剂盒按照制造商的说明提取DNA。

先前描述的扩增寄生蠕虫的内部转录间隔区2 (ITS-2)片段的引物和PCR方案用于分子鉴定所涉及的metastrongylid物种。

然而，在通过Baermann技术对血管分枝杆菌呈阳性的那些样品中没有观察到扩增。

先前的研究报道了这种PCR检测血管曲霉的可变灵敏度，特别是在使用粪便样本时，因为DNA浓度低且存在PCR抑制剂。

此外，对在GenBank在所述正向引物的退火位点显示出一至三个突变。

因此，使用从Gasser等人(1993)修改的新正向引物(5′-acrtctgttcagggtgtt-3′)和新设计的反向引物(5′-GCAACATCGATGACGGTAGC-3′)，对那些鉴定为血管曲霉的幼虫进行新的PCR分析，所述反向引物靶向血管曲霉ITS-2的约330 bp片段。

使用在线软件Primer-BLAST。除了退火步骤外，PCR条件和方案与先前描述的相同，使用53℃的温度1分钟。

在Santiago de Compostela大学的测序和片段分析部门，用ABI 3730xl测序仪对选定的ITS-2片段进行纯化和测序。

使用chromas pro(technolysium，Brisbane，Australia)比对和编辑序列，然后使用BLAST对照GenBank数据库扫描共有序列。

本研究中鉴定的单一独特序列以登录号OM914984保藏在GenBank中。

风险因素分析

所有统计分析均使用统计软件R 4.0.3进行。

使用逻辑回归来确定不同因素对类圆线虫和三尾类呼吸线虫患病率的影响。

使用基于AIC值(赤池信息标准)的向前和向后条件方法从初始模型中消除因素，直到建立最佳模型。

接下来，评估所有成对的相互作用。优势比数值是通过将“e”提高到参照类别的逻辑系数的幂来计算的。

使用glm()和step()函数进行逻辑分析和AIC选择。

结果

犬猫心肺线虫的流行及分子鉴定

在53只动物中检测到心肺线虫幼虫和虫卵(12.3%；430个中的53个)，在狗中的患病率相似(11.5%；365只中的42只)和猫(16.9%；65个中的11个)(表1)。

表1。西班牙西北部犬猫体内亚线虫和三倍体心肺线虫的患病率

在27只动物；尽管使用Baermann-wet zel技术检测到大多数阳性动物，这些线虫的L1仅在六只动物(22.2%)中使用漂浮方法发现:五只狗和一只猫。

无论是狗还是猫，狗的亚线虫患病率低于猫，考虑性别时相似(p > .05)(表1)。

当考虑到年龄时，阳性狗的百分比相似，从2.6%到5.7%；相比之下，这种感染在猫中似乎随着年龄的增长而增加，在大于3岁的动物中达到37.5%的感染百分比(表1)。

在形态分析后，确定了三个亚二倍体物种(图1)。

最普遍的是猫中的深奥念珠菌，其次是狗中的血管念珠菌和普通念珠菌(表1)。

从血管曲霉阳性样品中获得的序列分别与从意大利和英国的狗中获得的血管曲霉序列MN104952和EU627597相同。

类似地，对深奥难懂曲霉呈阳性的样品与从意大利猫中获得的深奥难懂曲霉序列DQ372965和JX948745相同。

最后，从C. vulpis阳性样品中获得的序列与来自德国狐狸的C. vulpis序列KF836608相比，显示出99.6%的相似性。

32只动物(7.4%)检测到呼吸性三尾蚴虫卵；430个中的32个)，并且在狗和猫中的流行率是相似的(表1)。

在狗和猫中，雌性动物的感染率高于雄性动物，不同年龄组的阳性动物的感染率相似(表1)。

确定了两种呼吸性三尾虫(图2)，其中嗜气性大肠杆菌比勃氏大肠杆菌更普遍(表1)；在两种动物中都只检测到了嗜气性大肠杆菌。

胃肠道寄生虫混合感染的检测

除了心肺线虫之外，还检测到了十种消化道寄生虫(图2和S1 )。

犬中最常见的是钩虫线虫，其次是犬弓首线虫和十二指肠钩虫(表2)。

在猫中，属于囊异孢子虫属和贾第虫属的原生动物是最普遍的(表2)。

表2。来自西班牙西北部的犬猫对心肺和胃肠寄生虫及其混合感染呈阳性的百分比

在42只狗中的37只(88.1%)和对心肺线虫呈阳性的11只猫中的9只(81.8%)中发现了胃肠道寄生虫的混合感染(表2)。

心肺线虫两个家族的共同感染并不常见，因为仅在三只狗中检测到(7.1%；42只中的3只)和3只猫(27.3%；11个中的3个)。

在Metastrongylidae阳性的动物中，狗与犬的混合感染(58.8%；17个中的10个)和t . cati(80%；10只猫中有8只最常被检测到(表2)。

在感染三鞭虫的动物中，最常见的合并感染是钩虫(39.3%；28个中的11个)在狗中或患有膀胱异孢菌属物种。(75%;四分之三)在猫中(表2)。

影响心肺线虫流行的因素

逻辑回归结果显示，心肺线虫的患病率仅受与一些胃肠道寄生虫共感染的影响(表3)。

因此，在与带绦虫混合感染的动物中，狗体内的元线虫感染率明显较高。

犬血吸虫或十二指肠血吸虫。此外，那些对肉孢子虫呈阳性的狗。对呼吸道三色蠕虫呈阳性的概率为4.7倍(表3)。

在猫中，在与猫食线虫共感染的那些动物中，被元线虫感染的风险高8.9倍(表3)。

表3。狗和猫的亚倍体和三倍体心肺线虫患病率的GLM模型结果。在建立最佳模型之前，会根据AIC移除一些因素

结论

我们的研究结果显示，在西班牙西北部的狗和猫中存在大量的心肺线虫。据作者所知，这项调查代表了该国首次在犬中发现C. vulpis、E. aerophilus和E. boehmi。

我们的结果可能反映了该国其他地区的情况，并表明需要在其他地区进行进一步的详细研究。

除了研究区域温和的气候条件可能增加心肺线虫寄生阶段及其在环境中的中间宿主的存活率之外，检测到的高感染率可能与样本动物的自由生活和狩猎行为有关。

事实上，大多数心肺线虫阳性的狗和猫表现出与其他胃肠道寄生虫的混合感染，包括来自西班牙的狗中的S. lupi的首次报道。

欧洲心肺线虫地方性疫源地的出现和建立引起了兽医从业者和诊断实验室的特别兴趣。

我们的研究结果表明，在西班牙西北部，这些寄生虫应包括在实验室常规诊断面板中，以及对具有呼吸或心脏临床症状的户外接触的狗和猫的鉴别诊断中，从而实施最合适的控制措施，包括对受影响动物的有效治疗。